采集精液前5~7天内必须停止性生活,并且不得有**、梦遗等情况,还应禁烟戒酒,忌服对生精功能有影响的药物等。采取精液时间以晨起为佳,采精前用温水将双手、**,尤其是**洗净。可采用**法或电动按摩**法引起排精。精液的排出具有一定顺序,开头部分来自前列腺、附睾及壶腹,伴有大量精子,***部分来自精囊,故应收集整份精液,不要遗漏任何部分,尤其是开头部分。正因为易丢失精液的***部分,故不能用体外**法收集精液。盛精液的容器应干净、无菌、干燥,采精前容器的温度应与室温相同;瓶子不应过大,但瓶口不应过小,以免将精液射出瓶外;还应贴上标签,记录姓名及取精时间。在冷天应将精液标本保温,放置在贴身内衣袋中,不可倾斜或倒置,尽可能在1小时内送到实验室。通过计算机图像处理功能对显微镜下放大的精子图像进行识别和跟踪计算,从而得出精子动静态各项参数。北京马精子分析W.H.O 6
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在精子形态学检查中,通过CASA系统对精子形态学特征进行分析,有些特征(细胞大小、形状、光学密度、尾的存在以及其它)可由操作者选择,这样就会引起同一标本在不同实验室或不同分析者测得的结果一致性较差[10]。4结论和展望计算机辅助**分析具有较好的可靠性、重复性和稳定性,与传统的光学显微镜目测估计相比,更具有快速方便、对比性强、便于交流等明显优点[11],常规**检查无法测定精子微细运动特点,显示CASA在男性不育症诊断筛选中的优越性。王益鑫亦发现,部分手工**检查正常的不育患者,进行**全自动分析及生化检测,均发现明显异常[12]。因此,CASA系统在男性生殖能力检验方面具有重要的实际应用意义。上海精子分析DCL该设备还具备良好的售后服务,Hamilton Thorne公司提供培训和技术支持,确保用户能够充分利用设备的功能。
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通过结果的生物学意义对结果质量进行评估当所有具生物学意义的参数在测试中表现出较小的可变性时则方法学可变性亦较低方法学可变性低则结果质量就高。CASA系统获得的数值与直观评估获得的数值进行分析和比较在精子数量和综合运动性上具有较好的相关性而·131·中国优生与遗传杂志2002第10卷第6期DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2002.06.091在前向运动精子百分率上的相关性较低]。Holt等报道了在常规实验条件下采用五种不同的CASA系统对**参数值进行比较,其结果为:采用同一个测定池由不同的操作者测定**参数;变异系数(CV)是29%活动精子比率的CV为24%平均路径速度(VAP)的CV为43∙85%。作者们指出该分析结果不应看作是不同CASA系统间的工作情况的比较实际上它揭示了操作者的错误是差异的主要来源。目前有待于寻找进一步的标准来评估CASA变量的结果质量。精子***的生物学功能是使卵细胞授精因此用夫妇中的授精结果来考察精子运动性是合理的只有在该基础上能够确定活动性参数的重要性。辅助生殖技术(授精IVF)的发展使检测精子质量与各参数间的关系的比较成为可能;同样可以验证CASA测定结果与精子真实质量间的相关性有利于CASA结果质量的提高。
精液显微镜检查精子计数:正常人精子计数为0.6×1012~1.5×0.012/L,相当于一次排出的精子总数为400×106~600×106。当精子计数值<20×106/ml或一次排精总数<100×106为精子减少,超过致孕极限而导致不育。精液直接涂片或离心沉淀后均未查到精子为无精症。见于先天性睾丸发育不全、畸形或后天睾丸损伤和萎缩(如睾丸结核、炎症、淋病、垂体或肾上腺功能异常的内分泌性疾病等)、输精管阻塞或是先天性输精管及精囊缺陷,是导致少精或无精的重要原因,也是导致不育的重要原因。检查有无精子也是检查输精管结扎术的效果观察。结扎六周后,连续检查无精子,说明手术成功,如果结扎两个月后,精液中仍有精子,说明手术不成功。全自动精子分析仪在临床Z疗中展现了明显的优势。
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CASA系统也可用于精子形态学评估。CASA系统可用来定量分析精子头部形态学、中段甚至主段的形态,可以把精子头部和中段分类为正常或者不正常,还可以给出头部和中段尺度、头部椭圆率和匀称性的均数、标准差和中位数,以及对染色的精子顶体区进行测量[3]。与人工操作相比,自动化系统更具客观性,精确度和重复性的潜力[4]。精确度和重复性不低于7%[5],这优于有经验的技术人员的手工评估。两个研究已经提示在CASA结果与生育力之间存在***联系。Coetzee等发现自动分析的正常精子形态的结果是预示体外受精率和妊娠率的有意义指标[6]。Garrett等发现**中能与透明带结合的、具有某些头部形态特征的精子所占的百分比(Z%),和直线速度(VSL)的精子的百分比,与大样本的低生育力夫妇的自然妊娠率是有***且**的关系。Z%和VSL与生育力间的关系显示是连续的,而且没有显示临界值;高于临界值,妊娠率也不会进一步增加[7]。CASA系统用量少,检测速度快,能够显著提高实验室的工作效率。北京马精子分析W.H.O 6
男性精液检测主要依赖计算机辅助精子分析仪(computer assistant semen analyses,CASA)。北京马精子分析W.H.O 6
美国HamiltonThorne的TOXIVOS精子分析仪已经被FDA和国内外毒理学实验室所使用。本试验研究目的对精子分析仪和血细胞计数板在大鼠附睾精子计数结果的比较验证。方法选取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,对三批次雄鼠的精子计数进行比较。健康雄鼠通过戊巴比妥钠麻醉实施安乐死后,取左侧附睾尾称重,将附睾尾部放入37℃预热的含有M199培养液平皿中,剪碎附睾尾,放入培养箱中37℃孵育5min,然后吸取1份精子悬液,用M199培养液进行一定倍数的稀释,混匀后,取1滴稀释液,滴入精子分析仪**载玻片上,将载玻片放入TOXIVOS精子分析仪载物台,进行精子计数,同时吸取稀释后的精子悬液滴入血细胞计数板内,通过光学显微镜进行计数,比较两种计数方法的差异性。结果***批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为165.9±91.7,140.0±59.6。三个批次的精子分析仪和血细胞计数板的精子计数结果无统计学差异(P>0.05)。结论精子分析仪是一种方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理学研究中具有重要的应用价值。北京马精子分析W.H.O 6
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