蛋白质分离纯化步骤(二) 2.4 样品的进一步分离纯化 用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有:凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等,样品前处理智能蛋白纯化系统上门安装。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。 1. 凝胶过滤层析 凝胶过滤层析(gel-filtration chromatography)又称为分子排阻层析或分子筛层析。它是将葡聚糖凝胶(Sephadex)装入一个柱子中,制成凝胶柱。这种凝胶颗粒具有网状结构,不同类型凝胶的网孔大小不同。当把蛋白质混合样品加到凝胶柱中时,比凝胶网孔小的蛋白质可进入网孔内,而大于网孔的分子则不能进入被排阻在凝胶颗粒之外。当用洗脱液洗脱时,被排阻的分子量大的蛋白质直接通过凝胶之间的缝隙先被洗脱下来,而比网孔小的蛋白质可连续不断地进入网孔内。这样的小分子不但流经的路程长,样品前处理智能蛋白纯化系统上门安装,而且受到来自凝胶内部的阻力也很大,所以蛋白质越小,从柱子上洗脱下来所需时间越长。由于不同蛋白质的分子大小不同,样品前处理智能蛋白纯化系统上门安装,进入网孔的程度不同,因此流出的速度不同,洗脱所用体积及时间不同,从而达到分离的目的。
实验室及中试放大规模蛋白纯化系统 Unique Autopure系列蛋白纯化系统 主要应用领域 : – 蛋白纯化系统主要应用于单抗、重组蛋白、疫苗、生化 药、、天然产物和多糖等生物制药领域。用于生物制品的下游工艺的分离纯化。 Unique AutoPure 系列蛋白纯化系统 : 产品特点及优势: – 模块化设计,提供多个配置,满足特殊工艺流程需求 - 低脉动高精度双柱塞输液泵 ,保证优异的分离重现性 ; – 全系统与液体接触的地方均由生物兼容性材料组成、符合FDA、USP VI等相关法规要求 ; – DAD全谱直读检测器,避免了传统的机械切换式检测器所带来的不稳定性及高故障率 ; – 固定波长检测器灯为长寿命LED灯,寿命大于8000小时,降低维护成本 ; – **技术紫外检测器流通池,低死体积、低峰拓展,提高了色谱分离度 ; – 高灵敏度在线pH、电导率、紫外检测器,低死体积、低峰拓展,提高了色谱分离度 ; – 集中了buffer选择阀,自动进样阀、柱位阀等自动化组件,提高了纯化的自动化程度 ; – 具有柱前、柱后、压差报警,气泡传感器检测等功能,极大的保护了系统及层析柱的安全性 ; – 层析工作站软件是一款功能强大、性能先进、高稳定性的色谱数据管理系
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