头尾相连式)。(1)侧链-侧链式(sidechain-to-sidechain)侧链-侧链式环化**常见类型是半胱氨酸残基间的二硫桥接,引入这种环化的方法是通过一对半胱氨酸残基脱保护然后氧化构成二硫键。通过选择性地移除巯基保护基可以实现多环的合成。环化既可以在解离后的溶剂里完成,也可以在解离前的树脂上完成。由于树脂上的多肽不易形成可环化的构象,因此在树脂上环化可能要比在溶剂中环化低效。侧链-侧链式环化的另一种类型是在门冬氨酸或谷氨酸残基与基础氨基酸之间形成酰胺结构,北京好RNA合成仪生产厂家,它要求多肽无论是在树脂上还是解离后,北京好RNA合成仪生产厂家,北京好RNA合成仪生产厂家,侧链保护基都必须能够选择性移除。第三种侧链-侧链式环化是通过酪氨酸或对羟基苯甘氨酸形成联苯醚。天然产物中这种类型的环化只在微生物产物中存在,而且环化产物往往具有潜在***价值。制备这些化合物需要独特的反应条件,因此不常用于常规多肽的合成。(2)终端-侧链式(terminal-to-sidechain)终端-侧链式环化通常涉及C末端与赖氨酸或鸟氨酸侧链的氨基,或者N末端与门冬氨酸或谷氨酸侧链。还有一些多肽环化是通过末端C与丝氨酸或苏氨酸侧链形成醚键而构成。(3)终端-终端式或头尾相连式。
碱基瓶组一般**少为4个标准碱基(A/C/G/T),同时搭配2-多个特殊碱基瓶位,用于荧光标记等合成。压力管路及输送管路DNA合成仪的一般原则需要保持内外气体隔绝,因此无论试剂瓶、碱基瓶均需密封保持一定压力。所有压力管路均采用特氟龙导管,直径为1/16—1/8吋。每个瓶子都有一个氩气压力管道及输送管道进入瓶盖插塞,对于亚磷酰胺,1—8号瓶其压力管道也作为排气管。氩气管要保持在液体水平以上,而输送管却伸到瓶的底部。当阀门正确设置打开时,储液瓶上部空间由氩气加压,液体被推进输送管,流到其目的地。亚磷酰胺瓶排气除了加压外,亚磷酰胺瓶都是用压力排气管排气的。把亚磷酰胺放入仪器前,要用氩气排除空气使其净化。净化是通过输送管输送气体,当气体输送到瓶内时,空气经压力排气管排出。这是由瓶子更换步骤自动完成的。废液瓶是输送系统的低压侧,必须将出口与大气相通。要确保排气管通到通风柜。如果排气管阻塞,将会产生反压,试剂和溶剂的输送会受到抑制。输送电磁阀试剂输送系统包括两个试剂阀块(8碱基仪器有3个)及2个或4个柱阀块。阀块控制气体和化学试剂流入柱子及出口。除亚磷酰胺和四唑以外,试剂和溶剂都被同时输送到所有活化柱。当有多个活化柱时。
**初是sanger法,后来发展了几种高通量测序方法1sanger法:双脱氧测序的原理,DNA合成时加上一个ddNTP从而终止这条链的延伸,毛细管电泳读取分析序列。一般教材讲的都是这种方法,经典,读长800bp,但是通量小成本高。2454:也称焦磷酸测序,一个run下来约400M的数据量。将emulsionPCR产物连磁珠上,放入PicoTiterPlate,测序反应是通过释放PPi经过ATP***化酶和荧光素酶作用发光D捕捉拍照,反应是连续的,所以遇到连续的碱基如polyA时,454易产生误差。3Solexa:边合成边测序,将DNA单链固定在芯片上,合成DNA簇,是一种可逆阻断的合成反应,每个循环只加上一个碱基、系统拍照一次。通过读取拍照信号分析序列,一个run约200个G数据量以上。目前能量比较高,不足是读长短,现在有PE150,可以测通300bp。4Soild:与454有相似之处,该方法更精细,磁珠富集,磁珠更小,密度更高。它的独特之处是连接反应测序,加入8碱基荧光单链混合物。一次测序读两个碱基,获得颜色编码组成的碱基序列,通过几轮反应**终得出序列。5Iontorrent:特点是小巧。试剂通过集成的流体通路进入芯片中,密布于芯片上的反应孔立即成为上百万个微反应体系。
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