[VIP第1年] 指数:3
加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min6.用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ulTE中7.加入1ulRNaseA(10mg/mL),37℃处理1h8.用酚():氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min)9.取上清,1/10V3MNaAc,℃沉淀30min以上10.沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用DNA提取缓冲液:100mMTris-HCl(),20mMEDTA(),NaCl，上海什么是RNA合成仪生产厂家,2%CTAB(W/V),4%PVP40(W/V)和2%巯基乙醇(V/V),PVP和巯基乙醇使用前加入5MKAc方法一和二,是大同小异.主要是DNA提取液配方不一样！成本也不一样！三、菌丝的总RNA的提取1.实验试剂(1)RNA提取缓冲液(CTAB):2%CTAB(W/V),2%聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V),100mMTris-HCl(),25mMEDTA,亚精胺Spermidine,NaCl，上海什么是RNA合成仪生产厂家，上海什么是RNA合成仪生产厂家,2%巯基乙醇(V/V,使用前加入).由于在高温灭菌条件下,Tris-HCl要和DEPC发生反应,所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC处理的水配制即可(2)SSTE:1MNaCl,SDS(W/V),10mMTris-HClEDTA(3)10MLiCl直接用蒸馏水配10MLiCl,加1‰的DEPC过夜后,高温灭菌(4)3MNaAc(5)氯仿:异戊醇(24:1)(6)酚():氯仿:异戊醇(25:24:1)(7)DEPC处理水用1‰的DEPC处理蒸馏水过夜,高温灭菌(8)无水乙醇。
用于和DNA或RNA结构类似的寡核苷酸合成的自动化仪器，即是DNA合成仪。通常用于固相合成法，每次在长的寡核苷酸链上接入一个核苷酸。加入每一个核苷酸均通过相同的化学反应和相应的嘌呤或嘧啶碱基衍生物作用。仪器不同，所用化学反应和操作细节也会随之发生变化。DNA合成的磷酸酰胺法得到了非常***的应用。操作步骤亚磷酰胺DNA合成的试剂：氨水切除溶液乙腈清洗溶剂12氧化混合物三lv乙酸(TCA)脱保护溶液N—甲基咪唑封闭试剂乙酐四唑偶联催化剂A、G、C、T亚磷酰胺单体保护碱基的5/—DM以以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例，操作步骤如下：1、对合成仪上所有试剂瓶中的试剂量认真检。2、在合成仪上装上标记好的干净的收集瓶。3、在合成仪中输入要合成的DNA序列。4、对选择的合成步骤进行检查。5、选择结束方法：仪器的原始状态为TritylOffAuto，如果想要通过5，—DMT基团连接纯化寡核苷酸，那么将其转变为TritylOnAuto结束状态。6、选择结束方法通常是为系统的原始状态。7、将你所希望的保存名字输入到每个柱监视器下。8、每一个收集瓶相应的DNA序列标记用代码代替。9、将每一个柱设置的详细资料打印出来。10、对打印出来的资料进行检查，判断是否正确。
11、为了确保合成仪上合成柱处于正确的位置，运行StartColumn步骤对每一个柱的位置进行检查。12、对是否充满连接在合成仪上的溶剂残留(废液瓶)进行检查。13、保证试管充分清洁干净，保证DMT废液管路通向分部收集器。14、将循环启动，运行开始程序对试剂管路进行清洗，将原来的试剂除去。日常维护1．流路节流阀应该1个月清洗1次节流阀，以避免阻塞，清洗时，先在水中煮沸15min，然后再在甲醇中超声波清洗。2．储液瓶需要保持氩气压力以及管路清洁。瓶子在亚磷酰胺及储液瓶位置上放置。3．瓶塞“O”形环zhi少对“O”形环一月检查一次，1年更换1次。比较仪器上的“O”形环与新的备用“O”形环，若有白色沉淀出现在“O”形环上，用棉花蘸取乙腈进行清洗。
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