[VIP第1年] 指数:3
寡核苷酸探针的非放射性标记时，可用以下几种方法：1．酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端一段互补的寡核苷核序列，此序列的5’-端多加一个A，与目的基因片段退火，再用Klenow酶延伸，使bio–dUTP掺入探针的3’末端。2．5’磷酸末端标记法带5’-磷酸的寡核苷酸探针，在咪唑缓冲液中用水溶性碳二亚胺（EDC）处理，可生成活性的磷酸咪唑中间体，与过量的乙二胺作用，浙江新品寡核苷酸合成仪哪里有，就可以引入一个带氨基的接臂。用活化生物素标记就可以得到5’-磷酸标记的寡核苷酸探针。3．酶标探针法用双功能联接剂如辛二酸双羟基琥珀亚胺酯联接寡核苷酸和碱磷酶，可以生成1：1的酶标寡核苷酸探针。此法省略了生物素-亲合素中间步骤，可减少非特异性反应。4．生物素酰肼胞嘧啶修饰法在亚liusuan盐催化下，生物素酰肼可置换寡核苷酸探针中胞嘧啶上的氨基而得生物素化寡核苷酸探针。5．寡核苷酸的酶促加尾标记法在末端转移酶的作用下，用非放射性物质修饰的核苷酸（生物素dATP；生物素-dUTP；地高辛-dUTP）可加到DNA的3’末端，每个探针DNA可加上10～20个修饰碱基。（1）取，插入冰浴中，浙江新品寡核苷酸合成仪哪里有，加入寡核苷酸（3pmol）×μl，5×加尾缓冲液20μl，浙江新品寡核苷酸合成仪哪里有，dUTP4μl（终浓度200μmol/L），修饰的dNTP（生物素-dUTP。
在于组成糖分子的不同，DNA为2-脱氧核糖，RNA则为核糖。DNA的双螺旋通过在两条链上存在的含氮碱基之间建立的氢键来稳定。组成DNA的四种碱基是腺嘌呤（A）、胞嘧啶（C）、鸟嘌呤（G）和胸腺嘧啶（T）。所有四种碱基都具有杂环结构，但结构上腺嘌呤和鸟嘌呤是嘌呤的衍生物，称为嘌呤碱基，而胞嘧啶和胸腺嘧啶与嘧啶有关，称为嘧啶碱基。两条核苷酸链沿着中心轴以相反方向相互缠绕在一起，很像一座螺旋形的楼梯，两侧扶手是两条多核苷酸链的糖一磷基因交替结合的骨架，而踏板就是碱基。DAN双螺旋是右旋螺旋。不同磷酸盐基团之间的凹槽仍然暴露在外。主沟宽，而小沟宽。两个凹槽的不同宽度决定了蛋白质对不同碱基的可接触性，这取决于碱基是在主沟还是小沟中。与DNA的蛋白质，如转录因子，通常与处在大沟中的碱基接触。脱氧核糖核酸理化性质编辑DNA是高分子聚合物，其溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性。
1977年，荧光标记的抗体被应用于识别特异性DNA—RNA杂交II。1980年，。[2]荧光原位杂交技术原理编辑荧光原位杂交技术技术原理是将荧光素直接或间接标记的核酸探针[或生物素、地高辛、dinitrophenyl（I）NP）、aminoacetylAAFfluorine（AAF）等标记的核酸探针与待测样本中的核酸序列按照碱基互补配对的原则进行杂交，经洗涤后直接在荧光显微镜下观察。[2]荧光原位杂交技术是一种重要的非放射性原位杂交技术，原理是利用报告分子（如生物素、地高辛等）标记核酸探针，然后将探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA杂交，若两者同源互补，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。此时可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待DNA进行定性、定量或相对定位分析。[1]荧光原位杂交技术优点编辑与其他原位杂交技术相比，荧光原位杂交具有很多优点，主要体现在：①F不需要放射性同位素标记，更经济安全。②F的实验周期短，探针稳定性高，特异性好，定位准确，能迅速得到结果。③F通过多次免疫化学反应，使杂交信号增强，灵敏度提高，其灵敏度与放射性探针相当。④多色F通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列。
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