[VIP第1年] 指数:3
DNA和RNA提取方法一、DNA的提取(方法一)1.实验试剂(1)DNA提取液:Tris HCl(pH),NaCl,EDTA,1％SDS(2)3MNaAc(3)TE:10mmol/LTris-HClmmol/LEDTA(4)酚():氯仿:异戊醇(25:24:1)(5)氯仿:异戊醇(24:1)(6)异丙醇(7)无水乙醇(8)75%乙醇(9)RNaseA2.实验步骤(1)取菌丝，北京新品RNA合成仪，北京新品RNA合成仪,在液氮中迅速研磨成粉(2)加入4mL提取液,快速振荡混匀(3)加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1),涡旋3～5min(此处是粗提没有加酚,可以节约成本)(4)1000rpm,4℃,5min(5)上清用氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次(10,000rpm,4℃离心5min)(6)取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或,混匀,静置约30min(7)用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次，北京新品RNA合成仪,吹干,重悬于500ulTE中(8)加入1ulRNaseA(10mg/mL),37℃处理1h(9)用酚():氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min)(10)取上清,1/10V3MNaAc,℃沉淀30min以上(11)沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用二、DNA的提取(方法二)1.菌丝2.加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液,快速振荡混匀65℃水浴30min,期间混匀2-3次3.加入1mL5MKAc,冰浴20min4.氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min)5.取上清。
碱基瓶组一般**少为4个标准碱基（A/C/G/T）,同时搭配2-多个特殊碱基瓶位，用于荧光标记等合成。压力管路及输送管路DNA合成仪的一般原则需要保持内外气体隔绝，因此无论试剂瓶、碱基瓶均需密封保持一定压力。所有压力管路均采用特氟龙导管，直径为1/16—1/8吋。每个瓶子都有一个氩气压力管道及输送管道进入瓶盖插塞，对于亚磷酰胺，1—8号瓶其压力管道也作为排气管。氩气管要保持在液体水平以上，而输送管却伸到瓶的底部。当阀门正确设置打开时，储液瓶上部空间由氩气加压，液体被推进输送管，流到其目的地。亚磷酰胺瓶排气除了加压外，亚磷酰胺瓶都是用压力排气管排气的。把亚磷酰胺放入仪器前，要用氩气排除空气使其净化。净化是通过输送管输送气体，当气体输送到瓶内时，空气经压力排气管排出。这是由瓶子更换步骤自动完成的。废液瓶是输送系统的低压侧，必须将出口与大气相通。要确保排气管通到通风柜。如果排气管阻塞，将会产生反压，试剂和溶剂的输送会受到抑制。输送电磁阀试剂输送系统包括两个试剂阀块(8碱基仪器有3个)及2个或4个柱阀块。阀块控制气体和化学试剂流入柱子及出口。除亚磷酰胺和四唑以外，试剂和溶剂都被同时输送到所有活化柱。当有多个活化柱时。
使大量人力、物力、财力得以节省，以便将来能够对酶的结构进行改变，使其在工业上更有价值。对蛋白质和多肽的结构进行改变，使新***得以制备，并且对有关人类疾病和遗传调控的新领域进行了开拓。有效方法分离和制造目的基因的一些有效方法在基因工程学工作者艰苦细致的探索研究下已经掌握了。通常而言，目前有反向转录法、基因组扩增法、人工合成三种获取目的基因的方法。1、人工合成全长引物根据某一蛋白质的基因序列或氨基酸序列，进行设计，模版DNA通过OVERLAP方法来形成，再利用PCR扩增的方法使双链DNA得到，之后在克隆载体或者表达载体中转化克隆PCR产物。目前为止，速度zui快，准确率zui高的方法是化学合成全基因，同时能够以密码子在不同宿主细胞的不同的实验需求和偏爱性，对基因序列进行设计，使表达水平得以提高。2、反向转录法对于分子量较大而又不知其序列的基因，反向转录法比较适用，其的模板为目的基因的mRNA，对上下游引物进行设计，对反转录酶合成碱基互补的DNA片段进行借助，然后再在DNA聚合酶的作用下将双链cDNA合成，也就是目的基因的双链DNA。3、基因组扩增法基因组能够通过基因组抽提试剂盒直接从细胞、植物、血液、动物**中分离出来。
文章来源地址: http://yiqiyibiao.chanpin818.com/zyyqyb/qtzyyqyb/deta_3542121.html
免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。
