九、精液酸碱度(pH)检查[正常参考值]7.2-8.0。[临床意义]1.精液pH值<7.0,多见于少精或无精症,常反映输精管道阻塞、先天性精囊缺如或附睾病变等。2.精液pH值>8.0,常见于急性***,如精囊炎、前列腺炎等。十、男性生育力指数测定[计算公式]I=M(N×V)/(A×106)式中I为男性生育力指数;M为活动精子百分率;N为每毫升的精子数;V为精子运动的速度;A为畸形精子的百分率。[正常参考值]正常人生育力指数>l。[临床意义]1.生育指数为0,表明完全无生育能力。2.生育指数为0-1之间,表明有不同程度的生育障碍。精子分析仪与人工方法相比具有客观,高效,高精度的优点。北京前向运动精子分析DCL
美国Hamilton Thorne的TOX IVOS精子分析仪已经被FDA和国内外毒理学实验室所使用。本试验研究目的对精子分析仪和血细胞计数板在大鼠附睾精子计数结果的比较验证。方法选取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,对三批次雄鼠的精子计数进行比较。健康雄鼠通过戊巴比妥钠麻醉实施安乐死后,取左侧附睾尾称重,将附睾尾部放入37℃预热的含有M199培养液平皿中,剪碎附睾尾,放入培养箱中37℃孵育5 min,然后吸取1份精子悬液,用M199培养液进行一定倍数的稀释,混匀后,取1滴稀释液,滴入精子分析仪**载玻片上,将载玻片放入TOX IVOS精子分析仪载物台,进行精子计数,同时吸取稀释后的精子悬液滴入血细胞计数板内,通过光学显微镜进行计数,比较两种计数方法的差异性。结果***批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为165.9±91.7,140.0±59.6。三个批次的精子分析仪和血细胞计数板的精子计数结果无统计学差异(P>0.05)。结论精子分析仪是一种方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理学研究中具有重要的应用价值。上海绵羊精子分析W.H.O 5选择合适的CASA检测原理和设备,确保帧率要求,避免因设备问题影响检测结果。
在精子形态学检查中,通过CASA系统对精子形态学特征进行分析,有些特征(细胞大小、形状、光学密度、尾的存在以及其它)可由操作者选择,这样就会引起同一标本在不同实验室或不同分析者测得的结果一致性较差[10]。4结论和展望计算机辅助**分析具有较好的可靠性、重复性和稳定性,与传统的光学显微镜目测估计相比,更具有快速方便、对比性强、便于交流等明显优点[11],常规**检查无法测定精子微细运动特点,显示CASA在男性不育症诊断筛选中的优越性。王益鑫亦发现,部分手工**检查正常的不育患者,进行**全自动分析及生化检测,均发现明显异常[12]。因此,CASA系统在男性生殖能力检验方面具有重要的实际应用意义。
人类精子冷冻保存和储存:增加了冷冻样本的安全性、精液冷冻保存方案、快速液氮熏蒸冷冻、冷冻精液的解冻、玻璃化冷冻等内容,更具可操作性。本手册对人类精子的冷冻保存提出了具体建议:将样本分管分罐分开储存;对使用的材料和留存标本建立定期核验程序;所有储罐都应有液位监控报警系统,以监测温度和液氮液位,传感器应连接警报器,可通过实验室人员的终端进行提醒。新证据表明,玻璃化冷冻是冷冻保存精液的一种有价值的方法。该方法的原理是将小体积样本与无污染液氮直接接触并快速冷冻,可以防止冰晶的形成,并减少精子的渗透性损伤。在麦管玻璃化冷冻(无菌玻璃化冷冻)中,也可以使用封闭系统,不需要无菌的液氮。HAMILTON THORNE精子分析仪可分析参数,直线性(LIN):曲线轨迹的直线性。
CASA,即计算机辅助精子分析,是一种利用技术手段对精子活力、浓度和形态进行精确评估的方法。WHO第五版指南强调,相比人工检测,CASA提供更准确的数据和精子动力学参数,如前向运动和超活化运动,以及获能精子特征参数。研究显示,CASA检测的精子参数与体内外受精成功率和受孕时间有***关联。使用CASA分析仪,通常通过相差显微镜识别活动精子,适用于精子动力学分析。但要确保可靠结果,操作者需注意标本制备、帧频率、精子浓度等因素。每份样本至少需要分析200个活动精子的运动轨迹,更多精子样本有助于分类和变异性的分析。国内已有自主研发的精子分析仪,通常进行两次分析,每次至少200个精子,结果通过统计学分析得出。CASA在评估精子浓度时,需精确测量精子体积,确保**完全液化并充分混匀。计数板的精确性和计数一致性是关键,每次检测需满足5个视野和200条以上精子的比较低要求。对于高浓度**,可能需要稀释以减少误差。形态分析方面,CASA能够定量评估精子头部、中段和主段,尾部缺陷可通过活力评估。对于碎片过多或黏稠的**,可能需要洗涤以减少背景干扰。CASA中涉及一系列术语,如VCL(曲线速度)、VSL(直线速度)等,它们反映了精子运动的不同特性。HAMILTON THORNE精子分析仪可分析参数,前向性(STR):平均路径的直线性。上海绵羊精子分析W.H.O 5
通过计算机图像处理功能对显微镜下放大的精子图像进行识别和跟踪计算,从而得出精子动静态各项参数。北京前向运动精子分析DCL
二、生化及免疫学检验:1、精浆果糖测定【正常参考值】9.11-17.67mmol/L。【临床意义】(1)精液果糖为0,可见于先天性两侧输精管及精囊腺缺如、两侧输精管完全阻塞或逆行**。(2)精液果糖降低,常见于精囊炎和雄***分泌不足,果糖不足可导致精子运动能量缺乏,甚至不易受孕。2、精浆酸性磷酸酶测定【正常参考值】金氏法:>255nmol·s-1/L【临床意义】(1)精浆酸性磷酸酶含量增高,常见于前列腺肥大或早期前列腺恶性**患者。(2)精浆酸性磷酸酶含量降低,常见于前列腺炎患者。(3)精浆酸性磷酸酶检测是法医鉴定有无精液**敏感的方法。3、精浆顶体酶活性测定【正常参考值】36.72±21.43U/L。【临床意义】精子顶体酶活力与精子密度及精子顶体完整率呈正相关,其活力不足,可导致男性不育。4、精浆乳酸脱氢酶-X同功酶(LDH-X)测定【正常参考值】LDH-X***活性:2620±1340U/L;LDH-X相对活性:≥0.426。【临床意义】LDH-X具有睾丸及精子的组织特异性,是精于运动获能的关键酶,该酶检测可作为诊断男性不育有价值的指标。睾丸萎缩患者LDH-X降低或消失,精子发生缺陷时无LDH-X形成,少精或无精者可致LDH-X活性降低。服用棉酚也可抑制此酶活性。北京前向运动精子分析DCL
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