[VIP第1年] 指数:3
实验室在制作培养基时候的经验总结：1、培养基成份称量：培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，较好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。2、培养基成份的混合与溶化：培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。较好使用不锈钢加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置于高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。培养基中营养物质的浓度过大，会使渗透压过高，使细胞发生质壁分离而抑制微生物生长。上海自动培养基制备器
培养基的性能测试：1.外观控制：制备好的培养基应有相应的颜色，一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化，是否蒸发/脱水。2.污染控制：从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验)，确定无微生物生长方可使用。3.性能测试：(1)测试菌株选择：测试菌株是具有其表示种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基较佳性能的一套菌株。(3)半定量测试方法（改进的划线法接种法）。(4)定性测试方法（平板接种观察法）。用接种环取测试菌培养物，在测试培养基表面划平行直线。上海自动培养基制备器培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
用过的玻璃器皿：凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。
血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理：血清中沉淀物的出现有许多种原因，但好普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成的，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血渭解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物并不影响血清本身的质量。若想去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。何谓热灭活：一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤可以使补体去活化，而补体所参与的反应有：溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和启动。培养基各成份的混合和溶化：培养基所用化学药品均应是化学纯的。
培养基配制：素：为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。植物血凝素（PHA）：非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。PHA的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均被为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。培养基制备器微生物细胞组成元素的调查或分析，是设计培养基时的重要参考依据。上海实验室培养基制备器
制备培养基的操作要点：体培养基营养成分分布均匀。上海自动培养基制备器
培养基制备的基本方法和注意事项：1、培养基各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。好好使用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸2、培养基pH的初步调正因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，培养基各成分完全溶解后，应进行PH的初步调正。例如，牛肉浸液约可降低pH0.2，而肠浸液pH却会有明显的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的好终PH，保证培养基的质量。PH调整后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。3、培养基的过滤澄清液体培养基必须较全澄清，琼脂培养基也应透明无明显沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应折叠成折扇或漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。上海自动培养基制备器
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