[VIP第1年] 指数:3
培养基各成份的混合和溶化:培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。好好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，较后必须加以补足。培养基是生物制品领域中常用的物质，在细菌和细胞培养中十分必要。上海自动培养基制备器
三角培养瓶是细胞培养中的常用耗材，也可用于培养基的配制、混合及储存。利用三角培养瓶制备培养基可以按照以下步骤操作：配料：配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。溶解：淀粉溶解：少量冷水调成糊状。加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。调PH：用1N的盐酸或1N的NaOH把培养基调节到所要求的值。过滤：滤纸或棉花进行过滤。分装：一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。三角培养瓶：若作静置培养，则100ml培养基/250ml的三角培养瓶，很多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。试管分装：液体培养基一般装4-5ml，约试管的1/4高度；固体斜面培养基一般装3-4ml，约试管的1/5高度。上海实验室培养基制备器在配制用于观察和定量测定微生物生长状况的合成培养基时，常需在培养基中加入少量螯合剂。
制备培养基的小技巧1.培养基可按制备也可使用按生产的符合规定的商品化成品培养基，脱水培养基除附有和使用说明外还应注明有效期、贮存条件、适用性试验的质控菌株和用途。配制时应按使用说明上的要求操作，受潮结块不能使用，以确保培养基的质量符合要求。2.配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角烧瓶、刻度吸管、试管、培养皿等。使用的器皿应洗净，用蒸馏水冲净，烘干后方可使用。禁用金属容器如铁、铜、铝容器，避免金属离子与培养基成分结合，生成有害物质，影响细菌生长。
血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理：血清中沉淀物的出现有许多种原因，但好普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成的，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血渭解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物并不影响血清本身的质量。若想去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。何谓热灭活：一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤可以使补体去活化，而补体所参与的反应有：溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和启动。同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。
配制培养基的原则：根据培养目的需要选择适宜的营养物质。由于微生物营养类型复杂，不同微生物有不同的营养要求。因此，要根据不同微生物的营养需求选择适宜的营养物质，配制针对性强的培养基。自养微生物有较强的合成能力，能以简单的无机物如co2和无机盐合成复杂的细胞物质。因此，培养自养微生物的培养基应由简单的无机物组成。异养微生物的合成能力较弱，不能以CO2作为碳源或主要碳源，故应在培养基中至少添加一种有机物。注意营养物质的浓度与配比要合适：微生物只有在营养物质浓度及其比例合适时才能良好生长。营养物质浓度过低不能满足现生长需要，过高又抑制其生长。例如，适量的蔗糖是异养微生物的良好碳源和能源，但高浓度蔗糖则抑制菌体生长。金属离子是微生物生长所不可缺少的矿质养分，但浓度扩大，尤其是重金属离子，反而抑制其生长，甚至产生杀菌作用。全自动培养基制备仪主要特点：容器可自行拆卸更换和消毒，操作方便。上海自动培养基制备器
干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。上海自动培养基制备器
如何避免沉淀物的产生：在使用血清的时候，注意下列的操作：①解冻血清时，请按照的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，非常容易产生沉淀物。②解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。③勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。④血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。⑤若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。上海自动培养基制备器
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