实验室在制作培养基时候的经验总结:培养基分装:培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵,其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者)。分装时较好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时,分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为恰当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒,以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中,随该批培养基同时灭菌,以为测定该批培养基较终pH之用。培养基制备器解冻血清时,请按照的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)。中国澳门培养基制备器安装调试
培养基的质量测试:每批培养基制备好以后,应仔细检查一遍,如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其好终pH。将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜,如发现有菌生长,即弃去。用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基,培养24~48小时,如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次,如结果仍同前,则该批培养基即应弃去,不能使用。培养基的保存:培养基应存放于冷暗处,好好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周,倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。河南培养基制备器定制有时需要在培养基中加入消泡沫剂以减少泡沫的产生,或适当提高灭菌温度。
液体培养基,固体培养基的对应词,是微生物或动植物细胞的液状培养基。它具有进行通气培养、振荡培养的优点。在静止的条件下,在菌体或培养细胞的周围,形成透过养分的壁障,养分的摄入受到阻碍。由于在通气或在振荡的条件下,可消除这种阻碍以及增加供氧量,所以有利于细胞生长,提高生产量。培养基的配制:配料:配方换算→在容器中加入少量水→按照配方称取各种药品,依次加入→加足所需水量一药一勺,取药后立即盖上瓶盖。溶解:淀粉溶解:少量冷水调成糊状,加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95~97℃,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。调PH:用1N的盐酸或的1NNaOH把培养基调节到所要求的值。过滤:滤纸或棉花进行过滤。
天然培养基中血清主要作用:提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。提供和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质(氢化可的松、)、类固醇(雌二醇、睾酮、孕酮)等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及等,转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分。
加棉塞:分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。培养基的过滤澄清液体培养基必须澄清,琼脂培养基也应透明无明显沉淀。河南培养基制备器定制
培养基制备器不要过早打开灭菌锅,要等灭菌锅内气体和温度都降到与室温一致或相差不大时再打开灭菌锅。中国澳门培养基制备器安装调试
杀毒灭菌方式主要有三种类型:⑴高压蒸汽灭菌方式,此方法可用于大多数耐热培养基。⑵煮沸灭菌法方式:此方法可用于含有不耐高温物质的培养基。⑶过滤除菌方式:过滤除菌,采用无菌技术定量添加培养基。血液和可以用无菌技术抽取并加入冷却至约五十度的培养基中。当培养基中含有不耐热物质时可以使用此方法。培养基倒入平板:将灭菌溶化的培养基冷却至五十度后,倒入无菌干燥的培养皿中。微生物培养基制备的温度不能太高,否则培养皿内盖容易形成过多的冷凝水。中国澳门培养基制备器安装调试
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