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一般酶标仪的测定波长在400～750nm或800nm之间，完全可以满足ELISA的显色测定。目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶(HRP)，底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD)，其在过氧化氢溶液的存在下，经HRP作用，分别氧化为2，2，—二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。当pH值为5．0左右时，DAB在450nm波长处有比较大吸收，当pH值降为L 0时，比较大吸收波长移至492 nm，同时摩尔消光系数变大，显色加深，因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。
在用酶联免疫法测定抗原或抗体时，不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式，并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择，对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解，***咱们就来了解一下这两个测量方法。酶标仪与分光光度计、自动生化分析仪等的吸光度测定有所不同，一般分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路，但测定原理相同，都是使用朗伯-比耳定律，测定的都是样本的吸光度。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。酶标仪常用波长为：405nm，450nm，490nm与630nm。福建双检测模式酶标仪
灵活的临界值计算与曲线拟合算法，使K3 Plus酶标仪在各种诊断应用中数据操作的灵活性增强。江西多功能酶标仪
双波长检测的原理：在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。一般来说在ELISA操作中出现的黄颜色溶液，在450nm波长下会有比较大的吸收值。但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。在ELISA酶标仪中一般采用比较长作为参照波长，以消除非特异性吸收以及底部的指纹等其他干扰。所以在做现代ELISA实验时，比较好能选择双波长进行读数，可比较大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确性。江西多功能酶标仪
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