[VIP第1年] 指数:3
确定在凝胶/膜和滤纸之间没有气泡存在，否则会导致转膜不完全。6、保证膜和滤纸的大小和凝胶完全一样，过大和过小都会影响转膜效率。7、鸡来源的抗体与PVDF和尼龙膜有较强的结合能力，从而产生较高的背景，故如果选择鸡来源的抗体使用硝酸纤维素膜（NC膜）关于磷酸化蛋白检测的注意事项：1、保持待测蛋白处于磷酸化状态！在标本提取液中加入足够的磷酸酶***剂（NaF，可以防止去磷酸化），并将标本时刻保持在冰浴中！2、使用5%的BSA作为封闭试剂！不能使用脱脂奶粉！（因为脱脂奶粉中含有酪蛋白，会出现很高的背景）。抗体保存注意事项：1，上海本地192引物合成仪厂家、收到抗体后按要求离心后再打开管盖进行分装盒保存！2、对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃分装的量以一次实验用完为好，上海本地192引物合成仪厂家，**少不能少于10μl每份。因为分装体积越小，上海本地192引物合成仪厂家，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来！***避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。3、大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。4、长期保存，加入叠氮钠，防止细菌污染。色，自来水冲洗切片终止显色。8、复染细胞核：Harris苏木素复染3min左右。
5-BLDGE-40-1200-ZR-RF-LV-RK-GK-KG，伏，CPE10-M1BH-3OLS-QS-6，翼，KSV-5DNC-63-30-PPV-A-S6，LFR-1/4-D-7-MINI-A，ZNCM-32DSN-20-25-P，伏翼，SMT-8-NS-K-LED-24-B，CRLNZG-100/125MLH-24VDC，FRC-1/2-D-7-MAXI，ADVU-20-20-P-AMN1H-5/2-D-3-FR-C，PAN-6X1-GE，伏翼，GRE-1/8MS4-LRB-1/4-D5-AS，JMEBH-5/2-D-3-ZSR-C，QS-G1/2-16EGC-80-1500-TB-KF-0H-GK，CRQS-1/4-10，LF-D-MIDI-ADSBG-80-200-PPVA-N3伏，LR-1/2-D-O-MIDI翼，P-30-SWDSNU-25-160-PPV-A，U-M5，ADN-100-50-A-P-AMPYE-5-1/8-HF-010-B，伏，YSRW-16-26，翼，ADVU-40-200-A-P-AKMYZ-3-24-5-LED-PUR-B，KS4-1/2-I，H-22-SWDNCE-63-700-BS-"20"P-Q，伏翼，ADVUP-100-P-A-20Z1-25Z2，QST-G1/4-8LFR-1-D-5M-MAXI-A-MPA，DSNU-16-80-P-A，ADN-12-10-I-P-AESS-50-SN，MPPE-3-1/2-6-420-B，伏翼，ESS-20ADVU-32-15-P-A，，JMEBH-5/2-D-1-ZSR-CGRLA-3/8-QS-10-D，CPASC1-M1H-M-P-2,5，CPE18-M1H-5LS-QS-10QSM-1/8-6-I伏，DFM-20-125-B-PPV-A-KF翼，LFR-3/8-D-O-MIDIMSB4-1/4:D4:J5:M1:F3-WP，ADVULQ-50-80-A-P-A，STA-32-20-P-AVUVB-S-B42-ZD-QX-1C1，伏，DSNU-25-200-PPV-A，翼，FRC-3/8-D-MIDI-KAQSF-1/2-16-B。
（1）侧链-侧链式（sidechain-to-sidechain）侧链-侧链式环化**常见类型是半胱氨酸残基间的二硫桥接，引入这种环化的方法是通过一对半胱氨酸残基脱保护然后氧化构成二硫键。通过选择性地移除巯基保护基可以实现多环的合成。环化既可以在解离后的溶剂里完成，也可以在解离前的树脂上完成。由于树脂上的多肽不易形成可环化的构象，因此在树脂上环化可能要比在溶剂中环化低效。侧链-侧链式环化的另一种类型是在门冬氨酸或谷氨酸残基与基础氨基酸之间形成酰胺结构，它要求多肽无论是在树脂上还是解离后，侧链保护基都必须能够选择性移除。第三种侧链-侧链式环化是通过酪氨酸或对羟基苯甘氨酸形成联苯醚。天然产物中这种类型的环化只在微生物产物中存在，而且环化产物往往具有潜在***价值。制备这些化合物需要独特的反应条件，因此不常用于常规多肽的合成。（2）终端-侧链式（terminal-to-sidechain）终端-侧链式环化通常涉及C末端与赖氨酸或鸟氨酸侧链的氨基，或者N末端与门冬氨酸或谷氨酸侧链。还有一些多肽环化是通过末端C与丝氨酸或苏氨酸侧链形成醚键而构成。（3）终端-终端式或头尾相连式（head-to-tail）链状多肽可以在溶剂中环化或者固定在树脂上通过侧链环化。
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