[VIP第1年] 指数:3
长链引物合成，您要有引物中部分引物可能有突变的思想准备。17.如果测序发现突变，该如何处理？答：遇到这种情况，首先和核酸合成厂家取得，生产人员会检查生产的原始记录，主要是核对合成序列是否和定单一致，他们在电脑中一般会保留所有原始数据。在确认引物合成序列没有输错的情况下，建议重新挑取克隆测序，可能会找到正确克隆的。根据经验，40个碱基以下的引物，测1-2个克隆就可以了；40个以上的特别是用于全片段拼接合成的，就需要多测一些了。一般情况下，每个克隆突变的位点都不一样，提示正确的总是有的，就是如何找到它。也可以要求公司将引物**重合一次，不过重合的引物和*次的引物一样，都可能含突变，不会因为重合的引物就减少您的遇到问题的几率。基因拼接过程中，如果发现一段区域突变点不多，就多测几个，北京销售192引物合成仪哪家好，否则就重合一下引物。18.引物是经过PAGE纯化的，为什么还有碱基缺失或插入？答：理论上分析型PAGE变性电泳，可以区分引物之间一个碱基的差别。但是制备PAGE电泳，北京销售192引物合成仪哪家好，上样量都是非常大，电泳时的条带非常宽，带与带之间有重叠，分辨率已下降，电泳后割带回收目的引物时，北京销售192引物合成仪哪家好，很难说不割到差别*几个碱基的引物。国内有一个不好的现象，PAGE纯化的引物。
11.如何溶解引物？答：干燥后的引物质地非常疏松，开盖前zui好离心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或10mMTris，室温放置几分钟，振荡助溶，离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水，因为有些蒸馏水的pH值比较低（pH4-5）,引物在这种条件下不稳定。12.如何保存引物？答：引物合成后，经过一系列处理和纯化步骤，旋转干燥而成片状物质。引物在溶解前，室温状态下可以长期保存。溶解后的引物-20度可以长期保存。如果对实验的重复性要求较高，合成的OD数较大，建议分装，避免反复冻融。修饰荧光引物需要避光保存。13.合成的引物5’端是否有磷酸化答：合成的引物5’为羟基，没有磷酸基团。如果需要您可以用多核苷酸激酶进行5′端磷酸化，或者要求引物合成公司合成时直接在5′或3′端进行磷酸化，需要另外收费。14.引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题？连接反应需要引物的5’磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上，引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上，需要检查载体的酶切效果，需要改善引物退火的条件。SiRNA分子具有特殊的对称结构，退火的难度较大。
服务简介：印迹法（Blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。WesternBlot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。注意事项蛋白样品制备的注意事项：1、细胞数量达5×1062、将细胞裂解液再离心，收集上清液，加loading煮样5min。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳注意事项：1、做胶：防止漏胶、进气泡以及花胶（水封、插梳子和拔梳子）2、加样：两边加loading，加样量一样，加样时间要尽量短，以免样品扩散。3、电泳：将胶夹好放于电泳槽中，加电泳buffer（内外面不能联通），将电压调到90V开始电泳。转膜注意事项：1、泡膜：转膜之前将海绵、胶、膜都用预冷的转移buffer浸泡20min。（1.凝胶若是没在预冷的转膜buffer中浸泡，就会在转膜过程中出现凝胶皱缩，导致出现转移条带变形。，需用甲醇浸泡）2、转膜顺序：阴极碳板+海绵+三滤+胶+膜+三滤+海绵+阳极碳板3、转膜条件：250V1h40min冰浴中进行转膜（具体转膜时间要根据目的蛋白的大小而定；目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，反之则短）4、避免直接用手碰杂交膜，使用镊子。因为手上的蛋白和油脂会影响转膜效率并会使膜脏掉。5、夹好膜和凝胶后。
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