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食品中着色剂高效液相色谱仪(HPLC)检测方案

1　 仪器与试剂

1.1 仪器
　　梯度高效液相色谱仪，配紫外
　　色谱柱　C18  250mm×4.6mm×5μm
　　超声波水浴
　　分析天平（感量0.001g）
　　0.45μm水性滤膜

1.2 试剂
　　甲醇，色谱纯。
　　正己烷。
　　聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛
　　磷酸，色谱纯。
　　柠檬酸溶液：称取20克柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀。
　　乙酸铵溶液（0.02mol/L）称取1.54克乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经经0.45μm水性滤膜过滤。
　　无水乙醇-氨水-水（7+2+1）：量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL混匀。
合成着色剂标准液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100克，置于100mL容量瓶中，加pH=6水到刻度，配成水溶液。

2 　测定原理

食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离。

3 　试样溶液的制备

称取试样5.000g-10.000g(精确至0.0001g)，置于100ml烧杯中，加100ml水，用柠檬酸溶液调pH到6，加热至60度，将1克聚酰胺粉加少许水调成糊状，倒入试样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用pH=4的水洗涤3-5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3-5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3-5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经0.45μm水性滤膜过滤，进高效液相色谱仪测定。

4 　色谱条件

色谱柱：C18　250mm×4.6mm×5μm；
　　流动相：以20mmol乙酸铵为流动相A，以甲醇为流动相B，按下表规定经行梯度洗脱；

　　流速：1.0mL/min；
　　温度：室温；
　　进样量：20μL；
　　检测波长：254nm。

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