钙离子通过参与多种细胞内信号传导途径来调控绝大多数类型神经元的功能。由于钙离子信号在已知的细胞器结构中发挥其特定的功能,钙离子成像显得尤为重要。在神经系统中,由于神经元的多样性,导致钙离子功能也多样化。在突触前膜,钙内流激发贮存神经递质的神经小泡向胞外释放;在突触后膜,树突棘内钙水平瞬间升高,介导了突触可塑性;在细胞核内,钙信号能够调控基因转录。现在常使用的钙离子指示剂有化学性钙离子指示剂(ChemicalIndicators)和基因编码钙离子指示剂(GeneticallyEncodedIndicators)两类。钙成像技术发现钙离子产生各种各样的胞内信号。浙江光遗传钙成像nVoke
不论采用哪一类钙离子指示剂,总体上成像记录过程是非常类似的。包含钙离子指示剂的细胞可以通过荧光显微镜(fluorescencemicroscope)观测,然后通过CCD摄像机捕捉、记录图像。现在钙成像技术主要在以下几类神经科学研究方面有广泛应用:1.记录培养的神经元的活动。2.记录脑片上神经元的活动。3.huoti记录神经元的活动。由于离体实验本身的限制,现在越来越多的神经方面科学家倾向于做在体钙成像实验,希望能得到更准确且更能反应生理状况的数据。得益于双光子荧光显微镜的发展,现在在实验动物处于huoti状态下的钙成像技术取得了飞速进展。4.记录神经元树突和树突棘(spine)的活动。由于对于实验精度的要求,有些科学家不仅只想记录单个神经元的反应,他们还想更确切地知道神经元上哪些树突和树突棘参与了某个行为,也就是说他们需要在huoti条件下,对单根树突以及某些spine进行钙成像记录实验。由于双光子荧光显微镜和GCaMP6基因编码钙离子指示剂的发展,现在,对树突和树突棘用钙成像实验进行记录也成为了可能。江苏动物神经元钙成像nVista3.0钙成像系统集成自动控制和精确计时的多模式输入端口。
在神经系统研究中,我们常使用钙指示剂表征钙离子浓度变化,以反映神经元的活动。常见的钙成像方法有双光子荧光成像和单光子荧光成像两种,其中后者是研究脑神经活动的常用方法。但与双光子成像相比,单光子成像更易受到来自神经元的高水平串扰,导致信噪比降低。不仅如此,采集活动信号时还易被来自近距离通过的轴突和树突的信号所污染,造成的非特异性信号,这些均严重影响对神经元活动反应的精细成像。因而,在单光子荧光成像的基础上,研究团队在细胞核中表达遗传编码的钙指示剂,从而消除神经纤维信号。但与经典的胞质钙成像相比,钙进入细胞核的要求降低了这种成像的时间精度。
哥伦比亚大学ZuckermanMind大脑行为研究所的RuiM.Costa课题组于2020年10月7日在Cell杂志上发表了一篇题为AnAmygdalaCircuitMediatesExperience-DependentMomentaryArrestsduringExploration的文章,作者开发一种用于研究小鼠探索活动中瞬时停滞行为机制的新型实验,通过行为分析、环路映射、滔博生物-Inscopix自由活动钙成像显微镜结合光遗传学手段,提供介导经验依赖性的瞬时停滞行为的BLA神经元群体的jihuo和投射证据,表明BLA-CEA环路可以作为新颖/熟悉情境的检测器和效应器,用于基于空间位置的熟悉程度来生成自定进度的行为停滞,这一响应对于动物对未知环境进行安全有效的探索是至关重要的。钙离子成像可以用于感知觉,学习记忆,社会性行为等各种各样的研究中。
众所周知,只有游离钙才具有生物学活性,而细胞质内钙离子浓度由钙离子的内外流平衡所决定,同时也受钙结合蛋白的影响。细胞外钙离子内流的方式有很多种,其中包括电压门控钙离子通道、离子型谷氨酰胺受体、烟碱型胆碱能受体(nAChR)和瞬时受体电位C型通道(TRPC)等。神经元钙成像的原理就是利用特殊的荧光染料或钙离子指示剂将神经元中钙离子浓度的变化通过荧光强度表现出来,以反映神经元活性。该方法可以同时观察多个功能或位置相关的脑细胞。钙是模型动物神经细胞内重要的第二信使,参与细胞多种功能的调节,可以产生多种细胞内信号。浙江细胞钙离子钙成像什么价格
用标准行为测定法进行成像和行为实验的时间同步可进行深部脑区钙成像。浙江光遗传钙成像nVoke
随着功能光学成像技术的发展,神经学家们已经可以研究脑区和神经元内部的工作情况。功能钙成像技术就是其中之一,其主要原理是将外源性荧光信号和生理现象耦合起来——通过荧光染料信号的改变反映细胞内游离钙离子浓度,以此表示细胞的功能状态。目前它被广泛应用于实时监测一群相关神经元内钙离子的变化,从而判断其功能活动。该技术的出现使得科学家可以亲眼目睹神经信号在神经网络之中时间和空间上的传递穿梭。功能光学成像技术的发展使研究脑区和神经元的内部工作成为可能。浙江光遗传钙成像nVoke
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