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对于双光子（2P）钙成像而言，离焦和近表面荧光激发是两个大的深度限制因素，而对于三光子成像这两个问题大大减小，但是三光子成像由于荧光团的吸收截面比2P要小得多，所以需要更高数量级的脉冲能量才能获得与2P激发的相同强度的荧光信号。功能性三光子显微镜比结构性三光子显微镜的要求更高，它需要更快速的扫描，以便及时采样神经元活动；需要更高的脉冲能量，以便在每个像素停留时间内收集足够的信号。复杂的行为通常涉及到大型的大脑神经网络，该网络既具有局部的连接又具有远程的连接。要想将神经元活动与行为联系起来，需要同时监控非常庞大且分布guangfan的神经元的活动，大脑中的神经网络会在几十毫秒内处理传入的刺激，要想了解这种快速的神经元动力学，就需要MPM具备对神经元进行快速成像的能力。快速MPM方法可分为单束扫描技术和多束扫描技术钙成像技术（calcium imaging）是指利用钙离子指示剂或指示监测组织内钙离子浓度的方法。上海荧光钙成像grain lens
nVista神经元超微钙成像系统是可以在自由活动的动物上进行大范围的动态荧光成像的设备。通过nVist，您可以视觉化细胞活动，同步行为学，以及长期追踪神经环路的活动。nVista被应用于全球的研究机构中，产生了影响力的大数据库。主要特征：利用GCamp钙离子探针进行成像功能完整的数据采集软件，实现对焦，调焦，行为同步化单细胞分辨率下，可同时捕获成百上千神经元活动长时间追踪细胞，追踪时间可长达数月电子对焦，保证视野范围的恒定自由动物行为学：可运用标准行为学测量方法，行为操作箱，迷宫，旷场等可进行皮层，深部核团，以及脑干，中脑等区域的成像记录动物无需进行适应性训练钙离子成像+自由活动行为学1.锚定特殊细胞类型，例如特定的receptor/promotor/geneticmarker2.单细胞的空间分辨率，可以分析细胞在空间内的mapping和编码信息3.动物可在大范围的旷场内自由活动4.长时程追踪同一细胞的放电规律变化：用于学习，记忆，药物成瘾等研究。5.可对脑内的深部核团进行记录nVista神经元超微钙成像系统成像效果好。神经元超微钙成像系统技术参数专业的数据采集软件Inscopix数据采集软件可记录成百上千个神经元细胞。电子调焦功能，可通过软件实现物理调焦。上海荧光钙成像grain lens功能钙成像技术是将外源性荧光信号和生理现象耦合起来，通过荧光染料信号的改变反映细。
随着功能光学成像技术的发展，神经学家们已经可以研究脑区和神经元内部的工作情况。功能钙成像技术就是其中之一，它的主要原理是将外源性荧光信号和生理现象耦合起来——通过荧光染料信号的改变反映细胞内游离钙离子浓度，通过这个变化来daibiao细胞的功能状态。目前这种技术被广泛应用于实时监测一群相关神经元内钙离子的变化，从而判断其功能活动。该技术的出现使得科学家可以亲眼目睹神经信号在神经网络之中时间和空间上的传递穿梭。
钙成像具有以下几个优势：1.非侵入性：钙成像技术可以在活物细胞或组织中进行观察，无需破坏细胞或组织的完整性，因此是一种非侵入性的技术。2.高时空分辨率：钙成像技术可以实时观察细胞内钙离子的动态变化，具有较高的时空分辨率。可以捕捉到钙离子浓度的瞬时变化，揭示细胞内信号传导的快速过程。3.多样性：钙成像技术可以使用不同的荧光探针或基因工程技术，实现对不同类型的细胞或组织进行钙成像。可以根据需要选择适合的探针或方法，扩展应用范围。4.可定量分析：通过钙成像技术可以获得荧光信号的强度，可以进行定量分析，了解钙离子浓度的变化程度。可以通过比较不同条件下的钙成像结果，研究因素对钙离子信号的调控作用。5.可应用于多个领域：钙成像技术广泛应用于神经科学、细胞生物学、药理学等领域。可以研究神经元活动、细胞信号传导、细胞凋亡等生物过程，有助于揭示生物学机制和疾病发生及发展的过程。综上所述，钙成像技术具有非侵入性、高时空分辨率、多样性、可定量分析和广泛应用于多个领域等优势，成为研究细胞内钙离子动态变化的重要工具。利用钙离子指示剂检测组织或细胞内钙离子浓度，进而反应组织或细胞内某些活动或反应。
单光子显微技术是较成熟的荧光显微技术，但由于其使用的激发光波长较短，成像深度有限；能量较大,会造成对荧光物质的漂白,光毒性严重。激光共焦扫描显微镜由于共焦显微镜的孔径很小,实现样本三维成像要逐点扫描,成像速度慢,对样本损害大,很难用于长时间活细胞成像。而宽场显微镜能够很好地实现实时动态成像,光漂白小,因而较早应用于活细胞内的实时检测，但宽场显微镜由于离焦信号的干扰,难以实现多维成像。双光子荧光显微镜（Two-PhotonLaser-ScanningMicroscopy）。双光子显微成像技术是近些年发展起来的结合了共聚焦激光扫描显微镜和双光子激发技术的一种新型非线性光学成像方法,采用长波激发，能对组织进行深层次成像。常用的比较好激发波长大多位于800-900nm，而水、血液和固有组织发色团对这个波段的光吸收率低，此外散射的激发光子不能激发样品，因此背景第，光损伤小，适用于在体检测。双光子荧光成像技术能准确定位细胞内置入的微电极位置，从而观察胞体、树突甚至单个树突棘的活性。研究者可完整的观察神经组织的分辨荧光图像,甚至可以分辨神经细胞单个树突棘中的钙分布。钙成像技术（calcium imaging）是指利用钙离子指示剂监测组织内钙离子浓度的方法。上海荧光钙成像grain lens
功能性多神经元钙成像是一种通过记录神经元内Ca2+信号变化,监测大量神经元动作电位的光学记录技术。上海荧光钙成像grain lens
目前有三种在神经元上填充钙离子指示剂的方法，且都可以用于体内和体外研究。第一种方法是利用玻璃吸管将膜渗透性盐或葡聚糖形式的指示剂注入单个神经元中。此方法方便实验者控制单个神经元内的钙离子指示剂浓度且信噪比较高。第二种是利用“批量加载”的方法将钙离子指示剂染料负载神经元，观察对象为一群神经元。尽管此方法可能导致一些胶质细胞也被指示剂所标记，但提高了整体神经元的标记百分比，使研究者得以观察到一群神经元内动作电位相关性的活动。第三种也较为常用，通过病毒转染的方式使其基因编码钙离子指示剂。（A）单细胞注射法；（B）networkloading法；（C）通过病毒转染使其基因编码钙离子指示剂（expressionofgeneticallyencodedcalciumindicators,GECI）上海荧光钙成像grain lens
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